2 - [[2-Ethoxy-4- (4-hydroxy-1-piperidinyl) phenyl] amino] -5,11-dihydro-5,11-dimethyl-6H-pyrimido [4,5-b] [1,4 ] Benzodiazepin-6-on CAS 1234480-50-2

Produktbeschreibung

Produktname: 2 - [[2-Ethoxy-4- (4-hydroxy-1-piperidinyl) phenyl] amino] -5,11-dihydro-5,11-dimethyl-6H-pyrimido [4,5-b] [ 1,4] Benzodiazepin-6-on CAS-Nr.: 1234480-50-2

Synonyme:

XMD 8-92 (freie Base);

6H-Pyrimido [4,5-b] [1,4] benzodiazepin-6-on, 2 - [[2-ethoxy-4- (4-hydroxy-1-piperidinyl) phenyl] amino] -5,11-dihydro -5,11-Dimethyl-;

Chemischer GG-Verstärker; Physikalische Eigenschaften

Aussehen: weißes bis cremefarbenes Pulver

Assay: ≥98,0%

Dichte: 1,3 g / cm³

Siedepunkt: 741,8 ℃ bei 760 mmHg

Flammpunkt: 402,4 ℃

In vitro

XMD8-92 zeigt die größte Affinität zu BMK1 mit einer gemessenen Dissoziationskonstante (Kd) von 80 nM, während DCAMKL2, TNK1 und PLK4 Kds von 190, 890 bzw. 600 nM aufweisen. XMD8-92 wird mit der KiNativ-Methode gegen alle nachweisbaren Kinasen in HeLa-Zelllysaten profiliert und ist mit einem IC50 von 1,5 μM etwa 10-fach selektiver für BMK1 als die stärksten Off-Targets, TNK1 (IC50=10 μM) ) und ACK1 (auch bekannt als TNK2, IC50=18 μM). Andere schwache Off-Targets umfassen die Kinasedomäne 2 von RSK1 und RSK2, PIK4A und PIK4B sowie FAK. Bemerkenswerterweise wird MEK5 durch XMD8-92 bei bis zu 50 μM nicht signifikant gehemmt [1]. XMD8-92 zeigt eine hohe Selektivität für BMK1 in einem In-vitro-ATP-Stellen-Kompetitionsbindungstest gegen 402 Kinasen sowie in der KiNativ-Methode gegen alle nachweisbaren Kinasen in HeLa-Zelllysaten. XMD8-92 blockiert die EGF-induzierte Aktivierung von BMK1 mit IC50 von 240 nM und bei einer Konzentration von bis zu 5 μM hat XMD8-92 keine hemmende Wirkung auf die ERK1 / 2-Aktivierung durch EGF [2].

In vivo

XMD8-92 hemmt das Tumorwachstum in vivo signifikant um 95%. Die Pharmakokinetik von XMD8-92 wird bei Sprague-Dawley-Ratten unter einmaliger intravenöser oder oraler Gabe bewertet. Es wurde festgestellt, dass XMD8-92 eine Halbwertszeit von 2,0 Stunden von 26 ml / min / kg aufweist. XMD8-92 hat eine moderate Gewebeverteilung mit einem berechneten Verteilungsvolumen von 3,4 l / kg. XMD8-92 weist eine hohe orale Bioverfügbarkeit auf, wobei 69% der Dosis absorbiert werden. Nach einer oralen Einzeldosis von 2 mg / kg werden 30 Minuten lang maximale Plasmakonzentrationen von ungefähr 500 nM beobachtet, wobei 34 nM 8 Stunden nach der Dosis verbleiben. In Verträglichkeitsexperimenten werden während der 14 Tage hohe Plasmakonzentrationen des Arzneimittels (ungefähr 10 & mgr; M nach IP-Dosierung von 50 mg / kg) aufrechterhalten. XMD8-92 scheint gut verträglich zu sein und die Mäuse schienen gesund zu sein, ohne Anzeichen von Stress. Bei den mit XMD8-92 behandelten Mäusen wird keine Gefäßinstabilität beobachtet [1]. Die Behandlung mit XMD8-92 sowohl bei immunkompetenten als auch bei immundefizienten Mäusen blockierte das Wachstum von Lungen- bzw. Zervix-Xenotransplantat-Tumoren um 95%. Diese bemerkenswerte Antitumorwirkung von XMD8-92 in Lungen- und Zervix-Xenotransplantat-Tumormodellen beruht auf der Fähigkeit von XMD8-92, die Tumorzellproliferation durch das durch PML-Suppression induzierte p21-Checkpoint-Protein zu hemmen, und auf der Blockierung des Beitrags von BMK1 zur tumorassoziierten Angiogenese . Außerdem führt BMK1-Knockout (KO) bei Mäusen zu einer vollständigen und irreversiblen Entfernung des BMK1-Proteins, während die XMD8-92-Behandlung bei Mäusen nur die Aktivität von BMK1 unterdrückt, die reversibel ist. Zweitens kann die bei BMK1-KO-Mäusen beobachtete Gefäßinstabilität auf das Fehlen der C-terminalen Nichtkinasedomäne von BMK1 zurückzuführen sein, die während der XMD8-92-Behandlung von Tieren noch vorhanden ist [2].

Kinase-Assay

Die KiNativ-Profilierung von XMD8-92 wird sowohl mit ATP- als auch ADP-Acylphosphat-Desthiobiotin mit den folgenden Modifikationen durchgeführt. HeLa-Zelllysate (5 mg / ml Gesamtprotein) werden in Gegenwart von XMD8-92 bei 50 & mgr; M, 10 & mgr; M, 2 & mgr; M, 0,8 & mgr; M und 0 & mgr; M 15 Minuten vor der Zugabe der ATP- oder ADP-Acylphosphat-Sonde ( 5 μM Endsondenkonzentration). Alle Reaktionen werden doppelt durchgeführt. Die Sondenreaktionen dauerten 10 Minuten und die Reaktion wurde durch Zugabe von Harnstoff gestoppt und für die MS-Analyse verarbeitet. Die Proben werden mittels LC-MS / MS auf einem linearen Ionenfallen-Massenspektrometer unter Verwendung einer zeitsegmentierten "Zielliste" analysiert, um MS / MS-Spektren von allen Kinase-Peptid-Sonden-Konjugaten zu sammeln, die in HeLa-Zelllysaten nachgewiesen werden können. Diese Zielliste wird durch vorherige umfassende Analyse von HeLa-Lysaten erstellt und validiert. Bis zu vier charakteristische Fragmentionen für jedes Kinase-Peptid-Sonden-Konjugat werden verwendet, um Signale für jede Kinase zu extrahieren, und ein Vergleich des Inhibitors, der mit Kontroll- (unbehandelten) Lysaten behandelt wurde, ermöglicht die genaue Bestimmung der prozentualen Hemmung an jedem Punkt. Ein Manuskript, das die Details dieses gezielten massenspektrometrischen Ansatzes beschreibt, ist in Vorbereitung [1].

Tier Admin

Mäuse [1] 5 × 10 5 HeLa-Zellen werden in DMEM resuspendiert und subkutan in die rechte Flanke von 6 Wochen alten Nod / Scid-Mäusen injiziert (Tag 0). Am zweiten Tag (Tag 1) nach der Tumorzellinjektion werden die Mäuse in 2 Gruppen randomisiert (6 Tiere, XMD8-92, 1-28 Tage und 18 Tiere, Kontrolle). Die XMD8-92-Gruppe (1-28 Tage) wird zweimal täglich intraperitoneal mit XMD8-92 in einer Dosis von 50 mg / kg behandelt. Die Kontrollgruppe erhält als Kontrolle tägliche Injektionen der Trägerlösung. Am Tag 7 wird die Kontrollgruppe in 2 Gruppen randomisiert (6 Tiere, XMD8-92, 7-28 Tage und 12 Tiere, Kontrolle). Und am Tag 14 wird die verbleibende Kontrollgruppe in 2 Gruppen randomisiert (6 Tiere, XMD8-92, 14-28 Tage und 6 Tiere, Kontrolle). Die Behandlung mit XMD8-92 in den Gruppen XMD8-92 (7-28 Tage) und XMD8-92 (14-28 Tage) wird am Tag 7 bzw. am Tag 14 begonnen. Die Tumorgröße wird mit einem Messschieber gemessen und das Tumorvolumen bestimmt [1].

Verweise:

[1]. Yang Q et al. Die pharmakologische Hemmung von BMK1 unterdrückt das Tumorwachstum durch Promyelozyten-Leukämie-Protein. Krebszelle. 2010, 14. September; 18 (3): 258–67.

[2]. Yang Q et al. Targeting des BMK1-MAP-Kinase-Weges in der Krebstherapie. Clin Cancer Res. 2011 Jun 1; 17 (11): 3527 & ndash; 32.

[3]. Umapathy G, et al. Die Kinase ALK stimuliert die Kinase ERK5, um die Expression des Onkogens MYCN im Neuroblastom zu fördern. Sci Signal. 2014, 28. Oktober; 7 (349): ra102.

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• Ein paar: 2-[2-methoxy-4-[4-(4-methylpiperazin-1-yl)piperidin-1-carbonyl]anilino]-5,11-dimethylpyrimido[4,5-b][1,4]benzodiazepin-6-one CAS 1234480-84-2
• Der nächste streifen: Sitaxsentan Sodium CAS 210421-74-2